1 概述配资专业门户登录入口
SDS-PAGE 毫无疑问是 PAGE 的升级版，二者都是常用的电泳分离技术，尤其是 SDS-PAGE更为常用，几乎是 WB 实验的标配；而 PAGE（或强调为NativePAGE）相比之下在蛋白质实验中较少用到。
在这篇文章中，我们将讨论几个问题： • SDS-PAGE与原版PAGE在原理与应用范围上有什么区别？ • 为什么WesternBlot实验需要用SDS-PAGE？ • Native PAGE适用于什么情形？
2 关于两种技术与应用领域的区别
简单来说，首先发明出的PAGE是基础版，这个基础版的原理就是分子筛+电场。作为一个分离工具，用它跑什么分子都可以。但由于分离蛋白的需求，加上蛋白质分子的特性，为了在蛋白实验中加强蛋白质的分离效果，于是就有人想到在样本与缓冲液中额外加入SDS使蛋白质变性，使蛋白质分子在电泳过程中仅依据分子量大小进行分离，这就是SDS-PAGE。
它们的核心区别毫无疑问在于是否加入SDS（十二烷基硫酸钠），这是一种离子型去垢剂，通过破坏蛋白质中的非共价键使之变性，从三维构象变成线性结构，这个过程是通常说的蛋白质线性化。另一方面，SDS与蛋白质结合后形成复合物，通过赋予蛋白质大量负电荷来掩盖蛋白质本身表面携带的电荷，使其在电泳时的迁移率仅由分子量大小决定，而不受其原始电荷或形状的影响。
展开剩余69%PAGE分离DNA。图源：https://www.researchgate.net/figure/Sequence-of-DNA-duplexes-used-left-and-8-PAGE-gel-of-DB75-with-the-duplexes-right_fig2_49784949
因此 SDS-PAGE 与 PAGE 的核心区别在于： ➢ 在SDS-PAGE中： ○ 蛋白质在电泳过程中处于变性状态，仅作为线性结构存在，失去原本的高级结构； ○ 条带位置仅依据分子量的绝对大小。
➢ 而在PAGE中： ○ 非变性条件，保留蛋白质原本的结构与电荷属性，不进行额外处理； ○ 因此条带位置除了分子量还由电荷决定，蛋白质会根据其携带的表面电荷向不同电极方向迁移。
图源：https://www.bio-rad.com/zh-cn/applications-technologies/western-blotting-electrophoresis-techniques?ID=PQEENTWDLBV5
SDS-PAGE条带。图源：https://open.oregonstate.education/chembiolab/chapter/methods-for-sds-page/
3 Western Blot为什么需要用SDS-PAGE
WB一般都使用SDS-PAGE分离蛋白质，原因有以下几点： 1. 抗体识别线性表位：由于许多抗体只能识别蛋白质的线性表位，需要通过SDS-PAGE将蛋白质线性化，使其抗体表位暴露在外，以便抗体结合。
2. 分子量测定：变性后的蛋白质在电场中的迁移率仅与分子量有关，可以用Marker测量，从而准确估计目标蛋白的分子量。
3. 稳定性：变性过程破坏了蛋白的活性，避免发生反应，蛋白理论上性质更稳定一些。
4. 避免蛋白质聚集：变性过程破坏非共价相互作用，避免蛋白质聚集或形成复合物。跑WB为了后期抗体结合出清晰的条带，需要让样本中的蛋白质混合物分离成清晰的一个一个的分子；一旦发生聚集，条带就不准确了。
4 Native PAGE适用于做什么
原生版的PAGE是非变性的（NativePAGE），不加入SDS等变性剂，因此它最大的特点就是保留了蛋白质的活性。如果说SDS-PAGE是为了通过变性加强蛋白分离效果的魔改版，那么现在也有针对让PAGE保留蛋白活性的魔改升级版，如BN-PAGE。
针对PAGE非变性这一特点，它更适合应用在以下领域： 1. 需保持蛋白质活性的情况：由于是非变性条件，蛋白质保持其高级结构，因此其生物活性也得到保留。如果此时电泳仅作分离，后续还要继续研究如酶活性、配体结合能力以及其他需要保留原本功能的情况，就需要选择非变性的PAGE进行分离。
2. 分析蛋白质聚集体或蛋白质-蛋白质相互作用：NativePAGE可以用于分析蛋白质复合物。由于保留了蛋白间的相互作用，因此某些蛋白质也可能会以多亚基复合物的形式一起迁移，并以不可预测的方式移动。这种复合物常表现为弥散状条带配资专业门户登录入口，而非通常所见的清晰的条状。 图源：https://www.bjbalb.com/article.aspx?dd=70
发布于：湖南省凯丰资本提示：文章来自网络，不代表本站观点。
相关文章
沪深京指数
热点资讯
